Experiments in Bacterial Genetics: A Laboratory Manual
Bakterie są potężnymi systemami do badań genetycznych. Są szybko rosnące, łatwe w rozmnażaniu i utrzymaniu, a do ich analizy genomicznej i manipulacji genetycznych opracowano wiele narzędzi. Badanie bakterii i ich wirusów pozwoliło na rozszyfrowanie kodu genetycznego i ukształtowało nasze zrozumienie podstawowych procesów biologicznych, takich jak replikacja DNA, transkrypcja i translacja.
Niniejszy podręcznik zawiera zbiór procedur eksperymentalnych do badań genetycznych bakterii. Opisuje podstawowe metody izolacji i rozmnażania bakterii i fagów, oczyszczania genomowego DNA i plazmidów oraz wprowadzania DNA do bakterii. Opisano różnorodne strategie generowania i potwierdzania mutacji oraz tworzenia delecji i fuzji genów, z wykorzystaniem wymiany allelicznej, losowej transpozycji, rekombinacji i technologii CRISPR-Cas. Przedstawiono protokoły sekwencjonowania i ponownego sekwencjonowania genomu bakteryjnego, a także wysokowydajnego przesiewania mutantów poprzez sekwencjonowanie transpozonów.
Chociaż w niektórych protokołach wykorzystano określone gatunki bakterii, takie jak Escherichia coli, Salmonella enterica, Vibrio cholerae i Staphylococcus aureus, opisane tutaj metodologie można łatwo dostosować do stosowania z innymi bakteriami. Niniejszy podręcznik stanowi zatem cenne źródło informacji dla tych, którzy chcą przeprowadzać eksperymenty genetyczne na bakteriach.